小鼠视网膜色素上皮细胞分离方法的改良

目的:优化小鼠视网膜色素上皮(RPE)细胞分离培养方法。方法采用改良的一步酶消化法分离鼠RPE细胞。以生长曲线、细胞分裂时间等指标观察细胞生存活力及增殖状态;以光镜、免疫组织荧光法鉴定细胞。结果分离的黑色、圆形RPE细胞在1d后开始贴壁,3d后呈淡黑色、短梭形细胞且数量成倍增加,5d后细胞约占80%瓶底,7d后基本单层融合长满瓶底,呈典型的鹅卵石铺地样。1:2传代的细胞生长活跃、胞核透明、胞浆含丰富黑色颗粒,2~3d后达融合状态,细胞呈梭形及不规则形。 Keratin免疫荧光显示所获细胞纯度接近99%。结论一步酶消化法,可以成功分离培养小鼠RPE细胞,体外培养小鼠RPE细胞为研究视网膜相关疾病提供了细胞来源。